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    生物實驗中常用生化試劑作用

    時間:2013年11月10日信息來源:互聯網 點擊: 收藏此文 【字體:

    1.蛋白酶K:

    能水解消化蛋白質,特別是與DNA結合的組蛋白。再尿素和SDS中穩定。一般工作濃度是50—100μg/ml,推薦反應緩沖液:50mMTris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。

    2.SDS:

    十二烷基硫酸鈉. 溶解細胞膜上的脂類與蛋白質,因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜,并解離細胞中的核蛋白,SDS 還能與蛋白質結合而沉淀

    3.IPTG

    異丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于藍白斑篩選及IPTG誘導的細菌內的蛋白表達等.IPTG和乳糖的結構相似,所以它和乳糖一樣,可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結合,使阻遏蛋白的空間構像變化,四聚體解聚成單體,失去與操縱子特異性結合的能力,從而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以轉錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是,IPTG不被β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用于藍白斑篩選。作用極強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定

    4.X-gal

    5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,是IPTG的顯色試劑,在IPTG的催化下顯藍色。常跟IPTG一起用與藍白斑篩選。

    5.G418:

    一種抗生素,對幾乎所有的細胞都有毒性,是穩定轉染最常用的選擇試劑。當neo基因被整合進真核細胞基因組合適的地方后 ,則能啟動neo基因編碼的序列轉錄為mRNA,從而獲得抗性產物氨基糖苷磷酸轉移酶的高效表達 ,使細胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養基中生長。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉移、基因敲除、抗性篩選以及轉基因動物等方面得以廣泛應用。

    6.DMSO

    二甲基亞砜.實驗室常用于作液體層析溶劑,同時用作測試物質紫外消光值上時用作參照物.能溶于所有烷烴和烯烴。

    7.曲拉通X-100

    TritonX-100.用的細胞裂解液成分之一,在保護蛋白活性方面有一定作用. 能力介于NP40和SDS之間,偏向于NP40

    8.NP-40

    很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對核膜破壞的作用弱,結合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

    9、BSA

    牛血清白蛋白. 主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養作用。在動物細胞無血清培養中,添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。常用于蛋白定量中的內參和抗體稀釋液。

    10.甲酰胺

    甲酰胺被用作凝膠電泳中RNA的穩定劑,也用于穩定毛細管電泳中的變性單股DNA。

    11.TEMED

    四甲基乙二胺。促凝劑。在中性及堿性pH條件下,加入TEMED可加速凝膠聚合

    12.巰基乙醇

    一種強還原劑?蛇原蛋白二硫鍵,從而使蛋白保持溶解狀態,有利于與SDS的結合。使蛋白解離成單個亞基。

    13.甲叉雙丙烯酰胺

    N,N-甲叉雙丙烯酰胺,別名MBA,又叫亞甲基雙丙烯酰胺,次甲基雙丙烯酰胺,N,N-甲撐雙丙烯酰胺。作交聯劑與丙烯酰胺聚合而制備聚丙烯酰胺凝膠。

    14.過硫酸銨

    過硫酸銨(APS)的作用主要是提供自由基,然后在促凝劑TEMED的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。

    15.B27

    一種添加劑,用于神經肝細胞培養,被認為具有抑制膠質細胞生長的作用。

    16.DTT

    二硫蘇糖醇,常用還原劑,既有抗氧化作用。它能保護酶分子上的還原性基團,維持還原性環境,穩定酶的活性。又是一種蛋白質變性劑,破壞二硫鍵,濃度不同,起到的作用也不同。

    17.弗氏不完全佐劑和弗氏完全佐劑

    弗氏完全佐劑是一種油包水的乳濁液,含結核分枝桿菌的細胞壁成分。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續釋放,并刺激局部免疫反應。弗氏不完全佐劑用于初次免疫刺激。為了減少副作用,不含結核分枝桿菌成分的弗氏不完全佐劑用于加強免

    氏完全佐劑是一種油包水的乳濁液,能夠非常有效的誘導產生高滴度的抗體。弗氏完全佐劑含結核分枝桿菌的細胞壁成分,可以加強對抗原的抗體反應。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續釋放,并刺激局部免疫反應。

    18.吐溫 20

    Tween-20 ,常用的非離子去垢劑。

    19.吐溫 80

    Tweenum 80 ,除作乳化劑外,也用作某些水中難溶藥物的增溶劑。

    20. 十二烷基肌氨酸鈉脫細胞試劑,制備脫細胞組織工程支架材料

    21.PVPP

    PVPP對片劑具有崩解作用,能和各種不溶于水的藥物共容,能穩定化各種懸浮劑,又具有形成絡合物的能力以及吸附作用等,因而可用作醫藥助劑。也用于除去啤酒中的多酚。

    22.PIPES

    ,實驗室做緩沖劑用。全名是哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸),pKa是6.80。不參與也不干擾生物化學反應,價格比較貴。常用在免疫和細胞類的實驗中,PIPES有時還被用來制備大腸桿菌感受態。

    23.CTAB

    十六烷基三乙基溴化銨,一種去污劑,可溶解細胞膜,它能與核酸形成復合物,在高鹽溶液中((0.7 mol/L NaCl)是可溶的,當降低溶液鹽濃度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)時,從溶液中沉淀,通過離心就可將CTAB-核酸的復合物與蛋白,多糖類物質分開。最后通過乙醇或異丙醇沉淀DNA,而CTAB溶于乙醇或異丙醇而除去。CTAB法是現在實驗室最常用的一種提取核酸的手段。

    24。HEPES

    羥乙基哌秦乙硫磺酸,一種弱酸緩沖劑,主要作用是防止培養基pH迅速變化。在開放式培養條件下,培養基脫離了5%CO2的環境,CO2氣體迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此時可以維持pH7.0左右。一般在進行克隆化培養時要添加HEPES

    25.MOPS

    一種緩沖液,有抑制RNA酶的作用,一般和甲醛(用于變形RNA)用于RNA變性電泳

    26。鹽酸胍

    鹽酸胍等可使蛋白質結構中的氫鍵發生斷裂,這增加了非極性分子包括氨基酸側鏈的溶解度,減少了疏水相互作用。

    27。PMSF

    Phenylmethanesulfonyl fluoride,中文名為苯甲基磺酰氟。用于抑制蛋白酶.PMSF嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,應立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應予丟棄。PMSF在水溶液中不穩定。應在使用前從貯存液中現用現加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值為8.0時,20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min,這表明將PMSF溶液調節為堿性(pH>8.6)并在室溫放置數小時后,可安全地予以丟棄。

    28.溴酚藍

    pH指示劑,pH=3.0時呈黃色,pH=4.6時呈藍紫色。酸堿指示劑;非水滴定用指示劑,蛋白電泳染色;病毒化驗等。

    29。臺盼蘭

    臺盼藍(TrypanBlue)或稱臺盼蘭,是細胞活性染料,常用于檢測細胞膜的完整性

    30。二甲苯青FF

    用于瓊脂糖聚丙烯酰胺凝膠電泳的示蹤染料, 易溶于水和醇,可與溴芬藍按照一定比例配置loading buffer

    31。吖啶橙

    是一種熒光色素,與細胞中DNA和RNA結合量存在差別,可發出不同顏色的熒光,與DNA結合量少發綠色熒光,與RNA結合量多發桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性,能透過細胞膜,使核DNA和RNA染色。在熒光顯微鏡下觀察,吖啶橙可透過正常細胞膜,使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細胞中,因染色質固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光,或黃綠色碎片顆粒;而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染,因EB只染死細胞使之產生桔黃色熒光,由此可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞.它還可以用作移碼突變的誘變劑,能鑲嵌于兩個相鄰的堿基對之間,這樣在DNA復制過程中,會使DNA鏈增加或缺失一個堿基,造成移碼突變。吖啶橙染液有毒,操作時要戴手套,需避光。

    32。EDTA和EGTA

    EDTA--乙二胺四乙酸EDTA是螯合劑的代表性物質。能和堿金屬、稀土元素和過渡金屬等形成穩定的水溶性絡合物。此外EDTA也可用來使有害放射性金屬從人體中迅速排泄起到解毒作用。也是水的處理劑。EGTA--乙二醇雙(2-氨基乙基)四乙酸在.Mg2+存在下測定Ca2+時,可用EGTA直接滴定,滴定誤差小于0.3% ,比用EDTA滴定提高了選擇性..此外它與金屬離子形成的配合物的穩定性普遍比相應的EDTA配合物差。

    33.TRICINE

    N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸, 常見的電泳系統是Tris-甘氨酸系統;Tris-Tricine電泳則用于分子量小于10kDa的多肽和蛋白的電泳,能夠獲得較好的分離效果. 可以用前者代替。

    34、PVP40

    PVP40 中的CO - N = 有很強的結合酚類化合物的能力, 與其形成穩定的復合物, 常用于提取RNA時除去酚類。

    35、脫氧膽酸鈉

    離子型去垢劑,作用有:1、

    裂解細胞;2、

    溶解蛋白,尤其是可以溶解一些難溶于水的蛋白,如膜蛋白等;3、很適合做WB,但在Co-IP中使用,需要謹慎

    36、6-BA

    細胞培養中用到,細胞分裂素。

    37、碘代乙酰胺

    也叫作碘乙酰胺,2-碘乙酰胺. 用于有機合成,在蛋白組學中組氨酸和半胱氨酸的烷基化試劑,用于多肽測序以及酶抑制劑等,蛋白組學級試劑

    38、萘乙酸

    NAA,為廣譜性植物生長調節劑,可促進細胞分裂,誘導形成不定根,改變雌雄花比例,增加坐果率等

    39、番紅O

    藏紅T;

    氧化還原指示劑;生物染色;酸堿指示劑;滴定分析亞硝酸鹽。

    40、TTC

    2,3,5-三苯基氯化四氮唑(紅四氮唑),多用于藥物分析和瓊脂糖添加劑,在計數瓊脂中加入適量的TTC(0.5% TTC 1ML加到100ML瓊脂中),細菌菌落長成紅顏色,,對去除食品本底顆粒物干擾非常有意義。


     

    (作者:佚名 編輯:yndt)
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